Научные материалы по методу лантаноидного контрастирования СЭМ
Лантаноидное контрастирование
Сущность методики BioREE для подготовки к СЭМ – лантаноидное контрастирование. Принцип действия нашего метода основан на обработке живых клеток ионами металлов группы лантаноидов: La, Nd, Sm и др. Включаясь в метаболизм клеток и ингибируя их метаболические цепочки, эти тяжелые катионы маркируют внутреннюю структуру клетки, делая ее доступной для визуализации посредством СЭМ.
«Сточиковские чтения»
Сравнение метода BioREE с классическим СЭМ
MMSC (мезенхимальная стволовая клетка) на культуральном пластике
Лантаноидное контрастирование
Классический СЭМ
Продукты BioREE расширяют возможности применения метода СЭМ в анализе образцов биологических объектов, а также для длительной консервации образцов и проведения их последующего молекулярного анализа. В нашей принципиальной новой методике не применяются: тетраоксид осмия, тиокарбогидразид осмия, глутаральдегид, уранилацетат, параформальдегид.
Сокращение времени на подготовку био образца к сканирующей электронной микроскопии
Отсутствие необходимости жесткой фиксации образца, работа с «нежными» объектами
Нетоксичность и простота использования применяемых наборов реактивов
Высочайшая информативность результатов не имеющая аналогов в области СЭМ
Научные публикации
Последовательное маркирование ультраструктуры биологических объектов неодимом и свинцом в двухступенчатой схеме подготовки для сканирующей электронной микроскопии / Новиков И.А., Суббот А.М., Чеботарь И.В., Пак О.А. // Аналитика 2018, Т. 8, № 4(41), с. 358–363.
DOI: 10.22184/2227-572X.2018.41.4.358.363
Способ подготовки биологического образца к исследованию при помощи сканирующей электронной микроскопии / Новиков И.А., Суббот А.М., Чеботарь И.В., Пак О.А., Бурсов А.И., Ситников А.В. // Патент России № 2672356, 2018. Бюл. № 32.
Fast and easy visualization method of impression cytology probe with microbiota detection on the ocular surface / Yugay N.M., Novikov I.A., Subbot A.M., Khalatyan K.S. // 26th International Student Congress Of (bio)Medical Sciences, Groningen (Netherlands), 2019, p. 412.
A rapid method of whole cell sample preparation for scanning electron microscopy using neodymium chloride / Chebotar I.V., Novikov I.A., Subbot A.M., Mayansky N.A. // Micron 2019, 124. DOI: 10.1016/j.micron.2019.102687
Subbot, A.; Kondratieva, S.; Novikov, I.; Gogoleva, N.; Kozlova, O.; Chebotar, I.; Gazizova, G.; Ryabova, A.; Vorontsova, M.; Kikawada, T.; Shagimardanova, E.; Gusev, O. Life-On-Hold: Lanthanoids Rapidly Induce a Reversible Ametabolic State in Mammalian Cells. Biology 2021, 10, 607.
Аналоги и BioREE
Ближайшими аналогами BioREE в визуализации биологических образцов являются системы флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения. В отличие от них, наш метод более универсален и не связан с применением множества специфических контрастирующих агентов для визуализации различных структур клетки. Кроме того, BioREE обеспечивает визуализацию со значительно превосходящей глубиной резкости получаемых изображений.
В связи с распространением методов корреляционной микроскопии несомненными преимуществами использования методики BioREE являются более высокая выживаемость флуоресцентных меток и минимизация процессов деформации при одновременной подготовке образца к СЭМ, что позволяет с большей точностью сопоставлять изображения, полученные разными методами.
Сравнение BioREE с флуоресцентным окрашиванием
Митохондрии в астроцитах человека
Лантаноидное контрастирование
Флуоресцентное окрашивание
Процесс пробоподготовки
В сравнении с традиционными методиками подготовки образцов использование наборов BioREE в значительной степени расширяет возможности метода СЭМ при изучении биологических объектов.
Визуализация ультраструктуры подповерхностного слоя при высокой разрешающей способности
Идентификация клетки на сложных объектах и подложках за счет большей контрастности образца
Получение информации о сравнительном функциональном статусе клеток в образце
Более точный химический микроанализ без обеспечивающего электропроводность напыления
Вопросы и ответы
Технология суправитального лантаноидного контрастирования как раз создавалась для того, чтобы работать с минимально фиксированными и частично влажными биологическими образцами, сохраняя их функциональное состояние и получая при этом информативное изображение в SEM.
В сканирующем электронном микроскопе режим детектирования обратно‑рассеянных электронов (BSE) в сочетании с режимом низкого вакуума позволяет проводить исследования плохо проводящих и содержащих влагу образцов без обязательного напыления проводящего слоя, сохраняя их нативное состояние и уменьшая зарядовые артефакты на изображении
Подготовка образца к исследованию занимает от 10 до 30 минут.